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炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究
发布时间:2018-12-07 浏览量:1478

炮制与超微粉碎对水蛭药效影响的初步实验研究

吕文海 1 ,邱福军 2 ,王作明 3

1 、山东中医药大学,山东 济南  350014 2 . 中国药材公司,北京  100062 3 、山东省委医院,山东 济南 250001

[ 摘要 目的:比较水蛭煎剂、普通散剂的药效以及新法炮制与超微粉碎对其药效的影响。方法:用 BT-1500 型离心沉降式粒度分布仪测定了生、制水蛭超微散的粒度。通过小鼠抗凝血、抗血栓作用,比较了水蛭丝水煎剂 1/2 煎剂剂量的普通散、超微散、制水蛭超微散的药效。并对其安全性进行了考察。结果:供试品药效由强到弱为制水蛭超微散、生水蛭超微散、生水蛭散、生水蛭水煎剂、对照组。结论:水蛭经超微粉碎,尤其是新法炮制后超微粉碎,可明显改善气味、口感,提高药效。

[ 关键词 水蛭;新法炮制;超微粉碎;增效

[ 中图分类号 ]  R283 . 1   [ 文献标识码 ]B[ 文章编号 ] 1001-5302 2001 04-0241-04

水蛭作为经典的破血逐瘀药,近代在中医临床与中成药生产中得到了愈来愈广泛的应用,并成为了一种世界性药物。经前期工作,初步证明水蛭的主流药用品种为蚂蟥(宽体金线蛭 W hit mania pigra Whit man );切丝入药优于《药典》规定的切段入药;生用在活血化瘀等药效方面,优于传统烫制品;按新法制成的制水蛭能在改善原药气味的同时,较好的保存其内在成分,且溶出效果及抗凝血、抗血栓、降低血小板聚集率、改善微循环、降胆固醇等药效学指标,均优于传统烫制水蛭,部分指标也优于生水蛭,有保质增效的趋势 [1] 。但水蛭在临床应用中入汤剂味劣难服,易反胃败胃。临床中亦有研末或装胶囊吞服效优的经验。

近几年由于超微粉碎技术的发展,可达到使动、植物细胞 90% 以上破壁的细度。由于粒度的减小,也有利于改善药物的气味及服用口感。鉴于水蛭经炮制和超微粉碎后有无药效与应用方面的优势,未见报道,笔者对此作了初步的实验研究。

1 实验材料

1 . 1 供试材料

水蛭购自山东省立医院,经李定格、李峰老师鉴定为蚂蟥(宽体金线蛭 W hit mania pigra Whitman )。

1. 2 供试品制备

水蛭丝:原药材挑去杂质,擦净,盖湿纱布略润后切 2~3 mm 细丝。在切制过程中发现,部分药材中间填充有白色结晶性粉末,口尝无咸、涩味、初步印象为石膏,切丝晾干后过筛可大部脱落。经紫外灯照射 45 min 后密闭备用。

生水蛭水煎液:净水蛭丝 2 . 6 g ,加 10 倍量水浸泡 30 min ,微沸 30 min ,过滤,药渣加 8 倍量水,微沸 30 min ,过滤,合并滤液,定容 100 ml ,浓度为 26 ˙ ml -1

生水蛭普通散:净水蛭丝经粉碎研磨过 100 目筛。

生水蛭超微散:净水蛭丝经 SQW-6 型三清微粉机粉碎。出料温度 35~40 ℃。

制水蛭超微散:净水蛭丝酒润麸制炮制后, SQW-6 型三清微粉机粉碎。出料温度同上。

3 种散剂均平铺一薄层,经紫外灯照射 45 min 后,密切保存备用。

1. 3   实验动物与仪器

昆明种小鼠(山东中医药大学动物房提供): SQW-6 型三清易辰超微粉碎机; BT-1500 型离心沉降式粒度分布仪。

实验方法与结果

1. 1 水蛭超微散粒度的测定

按《药典》规定,水蛭普通散的粒度为( 150 ± 6 µ m 。生、制水蛭超微散的粒度经BT-1500型离心沉降式粒度分布仪测定,结果见表1、表面化。实验表明,生、制水蛭经微粉机粉碎,可使其中位径分别达到10 . 24µ m 和7 . 79µ m ;最大粒径分别为72µ m 和24 . 81µ m ;50%的粒度在10µ m 和8µ m 以下,90%的粒度在50µ m 和23µ m 以下,确能达到超微的效果,而且经新法炮制后更利于粉碎,其粒度明显小于生水蛭。

表1生水蛭超微粉粒度分布测试结果

粒径        区间频率       累积频率

/ µ m            /%               /%

0 . 00 ~1 .00       3.33            3.30

1. 00 ~ 2.00       4.70            8.80

2. 00 ~ 3.00       4.93            12.93

3. 00 ~ 4.00       5.38            18.32

4. 00 ~ 5.00       5.27            23.59

5. 00 ~ 6.00       4.71            28.30

6. 00 ~ 7.00       5.40            33.70

7. 00 ~ 8.00       5.79            39.49

8. 00 ~ 9.00       5.50            44.99

9. 00 ~1 0.00       4.23            49.22

1 0 . 00 ~1 1.00       3.86            53.08

11. 00 ~1 2.00       0.72            53.80

12. 00 ~1 3.00       0.00           53.80

13. 00 ~1 4.00       0.78            54.58

14. 00 ~1 5.00       3.15            57.73

15. 00 ~ 20.00       10.59            68.31

2 0 . 00 ~ 30.00       20.19            88.50

3 0 . 00 ~ 40.00       1.13            89.63

4 0 . 00 ~ 50.00       1.02            90.65

5 0 . 00 ~ 60.00       6.19            96.84

6 0 . 00 ~ 70.00       3.05            99.89

7 0 . 00 ~ 72.00       0.11            100.00

72. 00 ~ 73.00       0.00            100.00

73. 00 ~ 74.00       0.00            100.00

注:中位径 10 . 24 µ m    最大粒径72µ m

2 . 2   供试品对小鼠凝血时间的影响 取体重( 28 ± 3 g 的成年雄性小鼠,随机分为 5 组。水蛭煎剂组以 0 . 4 mg ˙ g -1 剂量灌胃。 3 种散剂组每天灌胃临时配成 13 mg ˙ ml -1 的混悬液,以 0 . 2 mg ˙ g -1 的剂量灌胃(煎剂的 1/2 量)。用生理盐水作对照。每天 3 次,连续给药 3 d , 4 天给药 1 h 后,从小鼠眼内毗球后静脉丛取血,按毛细管法 [2] ,测定各组小鼠的凝血时间,经 t 检验统计分析,结果见表 3 。实验表明,水蛭煎剂与水蛭散剂均有确切的抗凝活性。 1/2 剂量的散剂,其抗凝效果优于汤剂。超微散的抗凝活性有优于普通散的趋势,制水蛭超微散又明显优于生水蛭超微散。提示水蛭用新法炮制和超微粉碎后有利于增强其抗凝活性。

2   制水蛭超策粉粒度分布测试结果

粒径        区间频率       累积频率

/ µ m            /%               /%

0 . 00 ~1 .00        2 . 59              2 . 59

1. 00 ~ 2.00       4. 19              6 . 77

2. 00 ~ 3.00        6 . 51            1 3 . 28

3. 00 ~ 4.00       5. 22             18. 50

4. 00 ~ 5.00        12 . 06              30 .5 6

5. 00 ~ 6.00        6 . 20              36 . 75

6. 00 ~ 7.00        7 . 03              4 3.7 9

7. 00 ~ 8.00        6 . 26              50 . 05

8. 00 ~ 9.00        6 . 85              56 . 8 9

9. 00 ~1 0.00        2 . 84              5 9. 73

1 0 . 00 ~1 1.00       3. 51              6 3. 24

11. 00 ~1 2.00       0. 64              6 3.8 8

12. 00 ~1 3.00       0.00            6 3.8 8

13. 00 ~1 4.00       0. 72              6 4. 60

14. 00 ~1 5.00        2 . 77              67 . 37

15. 00 ~ 20.00        4 . 0 9             71 . 46

2 0 . 00 ~ 30.00        4 . 75              76 . 21

3 0 . 00 ~ 40.00       1. 99              78 . 20

4 0 . 00 ~ 50.00        3 . 38              81 . 58

5 0 . 00 ~ 60.00        2 .1 6              83 . 7 4

6 0 . 00 ~ 70.00        1 . 92              85 . 66

7 0 . 00 ~ 72.00        4 . 61              9 0. 27

72. 00 ~ 73.00        6 . 17              96 . 43

73. 00 ~ 74.00        3 . 57             100.00

注:中位径 7 . 97 µ m    最大粒径 24 . 81 µ m

3   供销试品对小鼠凝血时间的影响

组别                n          剂量       凝血时间          p

                         / mg ˙ g -1         / min

生理盐水          10        0 . 4         2.96 ± 1.43

生水蛭水煎剂      13        0 . 4        4 .9 5 ± 2 . 32        0 .0 5 ()

生水蛭普通剂      14        0 . 2        6 . 23 ± 2 . 73        0 .0 5 ()

生水蛭超微散      13        0 . 2        6 . 33 ± 2 . 60        0 .0 5 ()

制水蛭超微散      13        0 . 2        9 . 38 ± 2 . 19         0 .01 ()

注: () 示该组与上一组比较

2 . 3   供试品对小鼠出血时间的影响

取体重( 28 ± 3 g 的成年雄性小鼠,随机分为 5 组。以上法相同剂量给小鼠灌胃 3 d ,每天 2 次,第 4 天给药 1 h ,用剪尾法 [2] 测定各组小鼠剪尾 5 mm 的出血时间,结果见表 4 。实验表明,生水蛭水煎液与对照组相比,虽有作用增强的趋势但无显著性差异,而普通散剂组呈显著性差异,两种超微散均为极显著性差异,制超微散更优。

4   供试品对小鼠出血时间的影响

组别                n          剂量       凝血时间          p

                         / mg ˙ g -1         / min

生理盐水          10        0 . 4        7 .9 5 ± 2 . 58

生水蛭水煎剂      10        0 . 4        10 . 28 ± 3 . 19        0 .0 5 ()

生水蛭普通散      12        0 . 2        14 . 32 ± 7 . 08        0 .0 5 ()

生水蛭超微散      12        0 . 2        15 . 42 ± 5 . 09        0 .0 1 ()

制水蛭超微散      10        0 . 2        16 . 45 ± 4 . 55         0 .01 ()

注: () 示与 NS 组比较

2. 供试品对小鼠体内抗栓作用的影响

抗栓实验方法学研究认为,在( 37 ± 1 )℃的生理盐水中,测定小鼠尾出血时间,与鼠颈动脉旁路血栓形成法具有很好的平行性。可作为一种简便易行的抗血栓形成药物的体内初筛法用于实验 [3] 。取体重( 20 ± 2 g 的雄性小鼠随机分为 5 组,以给定剂量灌胃 3 d ,第 4 天给药 1 h 后,将小鼠固定,距尾尖 3 mm 处剪断,垂直放放( 37 ± 1 )℃生理盐水中,使尾端在液面下 3 cm ,记录出血时间,结果见表 5 。实验表明,体内抗栓作用,也以超微散为优,但生、制品之间的差异不明显。

5 供试品对小鼠体内抗栓作用比较

组别                n          剂量       凝血时间          p

                         / mg ˙ g -1         / min

生理盐水          10        0 . 3 ml         0 .9 5 ± 0 . 22

生水蛭水煎剂      10        0 . 390        1 . 09 ± 0 . 25        0 .0 5 ()

生水蛭普通散      12        0 . 195        1 . 24 ± 0 . 59        0 .0 5 ()

生水蛭超微散      10        0 . 195        1 . 66 ± 0 . 76        0 .0 5 ()

制水蛭超微散      10        0 . 195        1 . 69 ± 0 . 53         0 .01 ()

注: () 示与 NS 组比较

2 . 4 对小鼠安全性的考察

水蛭经炮制和超微粉碎后药效有所增强,其毒性是否增大?为此考察了供试品对小鼠的安全性。取体重( 20 ± 2 g 的健康小鼠 80 只,随机分为 4 组, 1 组给予 1300/ mg ˙ ml -1 的水煎液, 0 . 4 ml / 只, 3 / d 1 . 56 g ˙ d -1 (相当于《药典》规定的成人每日汤剂服用量的 200 倍)。其余 3 组分别给予 130/ mg ˙ ml -1 的生水蛭普通通散、超微散和制水蛭超微散 0 .3ml / 只, 3 / d 117mg ˙ d -1 (此为能通过灌胃器的散剂最大剂量,相当于《药典》规定成人每日服粉末量的 30 倍),给药后观察 1 周,结果小鼠活动、粪便、毛色正常,无死亡。每组平均体重增加 6~8 g ,说明水蛭经新法炮制和超微粉碎后用药是安全的。该结果与前期工作和水蛭的亚急性毒性报道 [4] 相一致,支持临床中认为“水蛭系疗效卓著的无毒品”的观点。

小结与讨论

3.1 水蛭丝入药,既有利于其药物成分的煎 出,又有利于祛除水蛭体内人为掺入杂质,优于《药典》规定的切段入药。

3 .2  生水蛭经超微粉碎, 90% 的粒度为普通散的 1/4 50% 的粒度为普通散的 1/15 ,且颜色变浅,腥味降低,质地细腻,利于吞服。 1/2 煎剂剂量的抗凝血、抗血栓作用优于水蛭丝煎剂,肯定更优于《中国药典》 2000 年版规定的水蛭段煎剂,证明多数临床经验认为水蛭服散效优是正确的,利用超微技术将更有利于水蛭药效的发挥。

1 . 3 水蛭经新法炮制后,有利于矫正其气味,超微粉碎后其粒度也小于生水蛭,最大粒径为生水蛭超微粉 1/3 ,仅为 24 µ m 。实验药效指标在3种散剂中呈最优趋势,值得进一步深入研究及推广应用。

1. 4虽然药物粒度的减小,有利于其溶解吸收并改善气味口感,但也会引起表面能和稳定性等方面的变化。制水蛭超微粉的稳定性及最佳粒度范围等问题,还有待于进一步研究。

1 . 5水蛭作为一种世界性药物,研究最多的品种是日本医蛭(H irude nipponica  Whitman ),而我国临床用药的主流商品是宽体金线蛭。该品种有效部位及有效成分的研究,目前几近空白。深入研究其成分,将有利于饮片质量的控制和炮制原理的研究,此类探索目前正在进行之中。

[参考文献]

[1]吕文每,王琦,武继彪,等 . 水蛭饮片炮制研究.中药材,1996 . 19(4):294

[2]李仪奎 . 中药药理实验方法学 . 上海:上海科学技术出版社,1991 . 494 .

[3]顾云,孟娟如 . 介绍一种简易的抗血栓药物体内筛选法 . 中国药理学通报,1991,7(4):317

[4] 陈小野,邹世洁 . 水蛭的医学研究概述 . 成都中医学院学报 . 1987 10  (5) 51 .

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